فهرست مطالب
عنوان صفحه
چکیده فارسی…………………………………………………………….. 1
فصل اول: مقدمه
1-1 پروتئین ALCAM. …………………………………………………………………. 3
1-2 سرطان ……………………………………………………………………………. 6
1-3 سرطان کولورکتال……………………………………………………….. 6
1-3-1انواع مختلف سرطان کوورکتال………………………………… 9
1-3-2 علائم شایع سرطان کولورکتال…………………………………….. 9
1-3-3 تعیین مرحله بیماری ………………………………………………… 10
1-3-4 تشخیص سرطان کولورکتال ……………………………… 13
1-3-5 انواع ژنتیکی سرطان کولورکتال و تغییرات مولکولی انها ……………………………………. 15
1-3-6 عوامل خطرزا در ابتلا به سرطان کولورکتال………………………………………….. 20
1-3-7 درمان های رایج سرطان کولورکتال…………………………………………………………. 21
1-4 مساله تحقیق ……………………………………………………………………………………….. 23
فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده
2-1 ALCAM در درمان سرطان……………………………………. 24
فصل سوم: مواد و روش ها
3-1 مواد مورد استفاده…………………………………………………………………………………. 27
3-1-1 باکتری مورد استفاده…………………………………………………………………………………………… 27
3-1-2 پلاسمید………………………………………………………………………………………………………………………. 27
3-1-3 انزیم ها……………………………………………………………………………………………………………….. 28
3-1-4 کیت های ازمایشگاهی……………………………………………………………………………………………….. 28
3-1-5 انتی بیوتیک ها…………………………………………………………………………………………………. 28
3-1-6 محیط کشت ………………………………………………. 28
3-1-7 ژل ………………………………………………………………………. 28
3-1-8 مواد شیمیایی……………………………………………………………………………………………. 28
3-1-9 وسایل و تجهیزات ازمایشگاهی……………………………………………………………………………. 28
3-2 انالیز بیوانفورماتیکی ناحیه V پروتئینALCAM.. …………………………………………………………………… 34
3-2-1 استخراج توالی مورد نظر………………………………………………………………………………………………….. 34
3-2-2 بهینه سازی توالی یا Optimization………………………………………………………………………………………….. 35
3-3 سنتز شیمیایی DNA ناحیه V پروتئین ALCAM……………………………………………………………………………… 35
3-3-1 سنتز شیمیایی ژن نوترکیب……………………………………………………………………………………………….. 35
3-3-2 پایداری و شرایط نگهداری DNA سنتز شده………………………………….. 35
3-3-3 محلول سازی DNA لیوفیلیزه……………………………………………………………………………………. 36
3-4 کلونینگ پلاسمید- AMP+ pBSK حاوی DNA ناحیهV پروتئین ALCAM ………………………………………………………………………. 36
3-4-1 اماده سازی باکتری شایسته………………………………………………………………………………………………. 36
3-4-1-1 مواد و محلول ها…………………………………………………………………………………………………………………………. 36
3-4-1-2 روش کار…………………………………………………………………………………………………………………….. 37
3-4-2 ترانسفورماسیون پلاسمید به سلول های مستعد TOP10 E.coli…………………………………………………………… 38
3-4-2-1 روش کار……………………………………………………………………………………………….. 38
3-4-3 ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………. 39
3-4-4 استخراج پلاسمید – AMP+ pBSK حاوی DNA ناحیه Vپروتئین ALCAM………………………………………………… 39
3-4-5 تایید آنزیمی پلاسمید استخراج شده……………………………………………………………. 41
3-4-5-1 هضم آنزیمی دوگانه یا Double digestion………………………………………………………………………………… 42
3-4-5-2 الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………….. 42
3-5 ساب کلونینگ ژن ناحیهV پروتئین ALCAM…………………………………………………………………………………….. 44
3-5-1 تخلیص DNA ناحیه Vاز ژل……………………………………………………………….. 44
3-5-2 ………………………………………………………………………….. 46
3-5-3 ترانسفورماسیون…………………………………………………………………………………………………… 46
3-5-3-1 اماده سازی سلول های شایسته……………………………………………………………………. 47
3-5-3-2 ترانسفورماسیون سلول های شایسته E.coli BL21(DE3) با محصول لایگیشن…………………………………… 48
3-5-4 ارزیابی کلونی ها…………………………………………………………………………………………………. 48
3-5-5 استخراج پلاسمید بیانی pet-28aحاوی ژن ناحیه VپروتئیALCAM……………………………………………………. 49
3-5-6 تایید انزیمی پلاسمید استخراج ……….. 51
3-6 بیان پروتئین ناحیه V پروتئین ALCAM…………………………………………………………………………….. 52
3-6-1 القاء بیان پروتئین به کمک IPTG…………………………………………………………………………. 52
3-6-2 بررسی بیان به کمک تکنیک SDS-page………………………………………………………………. 52
3-6-2-1 محتویات کیت. SDS-page ……………………………………………………………………..53
3-6-2-2روش انجام SDS_page………………………………………………………………… 54
فصل چهارم: نتایج
4-1نتایج حاصل از انالیز بیوانفورماتیکی پروتئین ناحیه V پروتئین ALCAM…………………………………… 58
4-1-1 نتایج حاصل از بهینه سازی توالی یا Optimization…………………………………… 58
4-2 سنتز شیمیایی DNA ناحیه …………………………………………… 63
4-3 کلونینگ پلاسمید- AMP+pBSKحاوی DNA ناحیه VپروتئینALCAM……………………………………………………….. 65
4-4 ساب کلونینگ ژن ناحیه V پروتئین ALCAM………………………………………………………………………………. 66
4-5 بیان پروتئین ناحیه V پروتئین ALCAMو تائید ان به کمک تکنیک SDS-page………………………….. 69
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
بحث……………………………… 71
نتیجه گیری……………… 83
منابع……………………………………… 84
چکیده انگلیسی………………………………..91
برای دانلود پایان نامه اینجا کلیک کنید
لینک بالا اشتباه است
:: بازدید از این مطلب : 120
|
امتیاز مطلب : 3
|
تعداد امتیازدهندگان : 1
|
مجموع امتیاز : 1